Чтение онлайн

Чаще всего вирус удается выделить из отделяемого канала шейки матки. Он редко определяется одновременно во всех образцах, полученных от больной, поэтому для уменьшения диагностических ошибок необходимо исследовать максимальное число образцов от одной пациентки.

Частота выделения антигена ВПГ – 2 у женщин в значительной мере зависит от фазы менструального цикла. Более чем у 70% пациенток, страдающих простым герпесом, он выделяется в начале лютеиновой фазы. В это же время отмечается усиление клинических проявлений ВПГ-инфекции у основного числа больных. Реже ВПГ выделяется в пред- и постменструальном периодах (у 12—30% больных). Частота выявления ВПГ у больных в остальные дни менструального цикла снижается до 5—8% . Значительный разброс в выявлении антигена ВПГ у женщин в различные дни менструального цикла показывает, что отрицательный результат однократного вирусологического исследования не может исключить полностью диагноз генитального герпеса. При подозрении на ВПГ- 2 инфекцию необходимо проводить повторное 1 раз в 7 дней, т.е. 2—4 раза в течение месяца вирусологическое исследование отделяемого мочеполовой системы у пациенток.

В специализированных вирусологических лабораториях вирус выделяют из инфицированного материала, полученного от больных, с помощью биологического метода, который состоит в изоляции ВПГ из клинического материала путем заражения культур клеток (выделение in vitro) или лабораторных животных, чувствительных к ВПГ (выделение in vivo). При выделении вируса в культуре клеток диагноз ставится через 24—48 часов и более на основании характерного цитопатического действия (ЦПД), которое оказывает ВПГ на клетки. Для выделения ВПГ in vivo можно использовать 12—13-дневные куриные эмбрионы и лабораторных животных (морских свинок, хомяков, крыс, собак, обезьян), у которых развиваются типичные для ВПГ- 2 инфекции симптомы.

Диагностическая ценность серологических методов при простом герпесе различна и зависит от формы инфекции (первичная, рецидивирующая), состояния реактивности организма больного, длительности заболевания и ряда других факторов.

В ответ на внедрение ВПГ в серонегативном организме начинается продукция специфических иммуноглобулинов класса М (IgM), которые определяются на 4— б день после инфицирования и достигают максимального значения на 15—20 сутки. С 10—14 дня начинается продукция специфических иммуноглобулинов G (IgG), несколько позднее – IgA. IgM и IgA сохраняются в организме человека недолго (1-2 месяца), IgG – в течение всей жизни (серопозитивность).

Диагностическое значение при первичной герпетической инфекции имеет выявление IgM и (или) четырехкратное увеличение титров специфических IgG в парных сыворотках крови, полученных от больной с интервалом 10—12 дней.

Рецидивирующий герпес обычно протекает на фоне высоких показателей IgG, свидетельствующих о постоянной антигенной стимуляции организма больной. Появление IgM у такой пациентки говорит об обострении болезни.

Для установления ВПГ-инфекции в диагностически сложных случаях необходимо комплексное вирусологическое обследование больных, включающее обнаружение антигена и анализ серологических показателей в динамике. Постановка диагноза герпетического цервицита только на основании серологического исследования может повлечь за собой диагностическую ошибку, так как низкие титры противо- герпетических IgG не всегда доказывают отсутствие активной герпетической инфекции. Выявление же титров IgG выше средних является показанием к дополнительному обследованию пациентки с целью подтверждения или исключения диагноза ВПГ- инфекции (табл. 3).

Таблица 3

Методы идентификации ВПГ

Метод идентификации ВПГ

Чувствительность, %

Специфичность, %

Сроки постановки реакции

на культуре клеток и на животных по ЦПД

80 – 100

100

2 – 7 дней

по антигену:

РИФ (прямой и непрямой метод),

иммуноферментный метод (ИФА),

иммунопероксидазный метод

70 – 75

90

1 – 2 часа

по ДНК:

полимеразно-цепная реакция (ПЦР),

ДНК – гибридизация in vitro и in situ

95

90 – 100

1 – 2 дня

по морфологии инфицированных клеток:

в световом микроскопе

в электронном микроскопе

50 – 80

10 – 80

80

100

1 – 2 часа

по антителам –

специфическим IgG и IgM (метод ИФА)

90 – 95

90 – 95

4 – 6 час

1.5. Mycoplasma genitalium, Ureaplasma urealyticum

Микоплазмы – самые мелкие прокариотические микроорганизмы, не имеющие клеточной стенки (это придает им сходство с L – формами бактерий) и способные к паразитированию на мембранах эукариотических клеток. Способность персистировать на мембранах клеток связана с наличием сходства структуры и состава цитоплазматической мембраны микоплазм с мембранами клеток эукариот и использовании микоплазмами их компонентов (прежде всего холестерина и фосфолипидов) для построения собственных структур. Микоплазмы имеют трехслойную цитоплазматическую мембрану, обеспечивающую целостность микробных клеток и частично замещающую в функциональном отношении отсутствующую клеточную стенку.

Основные характеристики микоплазм: отсутствие истинной клеточной стенки, мелкая кокковидная форма, паразитизм на мембранах эукариотических клеток, рост на плотных средах в виде мелких врастающих в агар колоний с приподнятым центром (“яичница – глазунья”), абсолютная резистентность к пенициллинам и другим действующим на синтез клеточной стенки антибиотикам. Характеризуются малым размером генома, низким содержанием Г+Ц в ДНК. Имеют от 104 до 113 нуклеотидов в 5S рРНК.

M.hominis, M.genitalum, M.fermentans вызывают инфекции, при которых преобладают урогенитальные поражения.

В составе рода Ureaplasma штаммы, выделенные от людей, составляют вид U.urealyticum.

Морфология

Наиболее типичны мелкие кокковидные формы, выражен полиморфизм.

Культуральные и биохимические свойства

Микоплазмы и уреаплазмы прихотливы к условиям культивирования. В составе сред необходимы холестерин и стерины, нативные сыворотки, витамины, соли. Основным источником энергии являются углеводы (особенно глюкоза) или аминокислоты (аргинин). Для усиления восстановительных свойств сред добавляют L- цистеин.Оптимум температуры для культивирования от + 35 до +37С.

Оптимум рН для глюкозоверментирующих микоплазм (M.genitalium, M.fermentans, M.pneumoniae) – около 8,0. Эти микоплазмы ферментируют глюкозу до углекислого газа со сдвигом рН в кислую сторону и изменением цвета среды с зеленого на желто – лимонный.

Колонии уреаплазм (ранее называли Т- микоплазмами (от “tiny -маленький”) значительно меньше колоний классических микоплазм, на средах с добавлением сульфата марганца их колонии окрашиваются в золотисто – коричневый цвет, в отличии от микоплазм уреаплазмы мало чувствительны к небольшим дозам линкомицина (15 мкг/ мл).